MARACAIBO, 27 DE FEBRERO DEL 2012
ESTUDIANTES DE LUZ
LIC. EN EDUCACION
MENCIÓN: QUÍMICA

GLOSARIO

El nadolol: Es un bloqueante no selectivo de los receptores betaadrenérgicos que compite con los agonistas betatanto por los receptores beta 1, localizados principalmente en el músculo cardíaco, como por los beta 2, ubicados mayormente en la musculatura vascular y bronquial.

El aparato yuxtaglomerular: Es una estructura renal que regula el funcionamiento de cada nefrona.

Los baroreceptores: Son terminaciones nerviosas sensibles a la distensión que se oponen a los cambios bruscos de la presión arterial, es decir, son receptores de presión.

El Atenolol: Es un fármaco del grupo de los beta bloqueantes, una clase de drogas usadas primariamente en enfermedad cardiovasculares.

El miocardio (mio: músculo y cardio: corazón): Es el tejido muscular del corazón, músculo encargado de bombear la sangre por el sistema circulatorio mediante contracción.

Celiprolol: Es el nombre genérico de un medicamento que actúa como bloqueador de los receptores β1 cardioselectivos, es decir que sus acciones son específicas en el corazón antes de llegar a ser efectivas en el pulmón, por lo que está indicado en medicina sola o combinado con otros medicamentos para el tratamiento de la hipertensión arterial.

Cromóforo: Es la parte o conjunto de átomos de una molécula responsable de su color. También se puede definir como una sustancia que tiene muchos electrones capaces de absorber energía o luz visible, y excitarse para así emitir diversos colores, dependiendo de las longitudes de onda de la energía emitida por el cambio de nivel energético de los electrones, de estado excitado a estado fundamental o basal.

Postsináptico: Es un incremento temporal en el potencial de membrana postsináptico causado por el flujo de iones cargados positivamente hacia dentro de la célula postsináptica.

 Espectrofotómetro:  Es un instrumento usado en la análisis químico que sirve para medir, en función de la longitud de onda, la relación entre valores de una misma magnitud fotométrica relativos a dos haces de radiaciones y la concentración o reacciones químicas que se miden en una muestra. También es utilizado en los laboratorios de química para la cuantificación de sustancias y microorganismos.

Diurético: Es  toda sustancia que al ser ingerida provoca una eliminación de agua y sodio en el organismo, a través de la orina.

 Derivatización: Es el proceso mediante el cual se transforma el analito por una reacción química a un derivado más fácil de analizar.

Lipólisis: Es el proceso metabólico mediante el cual los lípidos del organismo son transformados para producir ácidos grasos y glicerol para cubrir las necesidades energéticas.

Sulfonilureas: Son medicamentos pertenecientes a la clase de antidiabéticos orales indicados en el tratamiento de la diabetes mellitus tipo. Actúan aumentando la liberación de insulina de las células beta del páncreas.

Glucogenólisis: Es un proceso catabólico llevado a cabo en el citosol que consiste en la remoción de un monómero de glucosa de un glucógeno mediante fosforólisis para producir glucosa 1 fosfato, que después se convertirá en glucosa 6 fosfato, la glucólisis.

Automatismo: Es l movimiento o actividad propios de un mecanismo automático o un autómata en seres vivos, acciones no conscientes o no voluntarias: reflejos, tropismos, taxias, etc. También, en cierto modo, los instintos y el condicionamiento.

Las catecolaminas: (también llamadas neurohormonas o aminohormonas) son neurotransmisores que se vierten al torrente sanguíneo (en lugar de las hendiduras sinápticas, como corresponde normalmente a los neurotransmisores). Son un grupo de sustancias que incluyen la adrenalina, la noradrenalina y la dopamina, las cuales son sintetizadas a partir del aminoácido tirosina.

La diástole: Es el período en el que el corazón se relaja después de una contracción, llamado período de sístole, en preparación para el llenado con sangre circulatoria. En la diástole ventricular los ventrículos se relajan, y en la diástole auricular las aurículas están relajadas. Juntas se las conoce como la diástole cardíaca y constituyen, aproximadamente, la mitad de la duración del ciclo.

Perfusión: Introducción o circulación adecuada, lenta y continua de un líquido, como la sangre o un suero, en una vena o en una cavidad corporal.

Antianginosos: Son medicamentos que actúan sobre la angina de pecho, afección caracterizada por dolor paroxismal en el tórax, irradiado a veces al brazo izquierdo, con sofocación, constricción y sensación de muerte inminente debido al espasmo arterial.

INTRODUCCIÓN

El descubrimiento de la enantiomería constituye un avance trascendental en el desarrollo de fármacos clínicos basados en las propiedades o características estructurales, físicas, eléctricas y químicas de los diferentes enantiómeros. En 1848, Luis Pasteur al lograr la separación, por medios mecánicos, de enantiómeros inicia el estudio de las propiedades físicas y químicas de las moléculas asimétricas. Además, también puede atribuirse a Pasteur la primera evidencia de las diferencias existentes entre distintos isómeros ópticos. En 1858 describe que la forma dextro del tartrato amónico es más rápidamente destruida por el  Penicillium glaucum  que el isómero levo y establece, por primera vez, el papel que desempeña la estereoquímica en los mecanismos que regulan los procesos vitales. Las implicaciones de la estereoquímica en la terapéutica han sido bien establecidas durante las últimas décadas. La mayoría de los sistemas biológicos tienen preferencia por una forma estereoquímica sobre otra, en numerosos procesos bioquímicos. Los enantiómeros presentan, con frecuencia, características diferenciales que tienen una importante repercusión clínica; pueden tener una actividad farmacodinámica similar aunque con potencias intrínsecas muy diferentes. Un ejemplo representativo de esto lo constituye el agente betabloqueante Propanolol; la estructura S (-) es la forma activa, mientras que la forma R (+) es inerte. El S (-) propanolol es, aproximadamente 100 veces más potente que el R (+)-propanolol bloqueando la actividad cronotrópica e inotrópica del isoproterenol. La disposición del propanolol es esteroselectiva, ya que el S (-)-propanolol se une en mayor proporción a las proteínas plasmáticas que el R (+)-propanolol.

Cada isómero presenta un efecto farmacológico distinto; en una mezcla racémica el isómero d-propanolol es 40 veces más potente como antiarrítmico y antihipertensivo que el 1-propranolol.

En esta oportunidad el objeto de estudio es el racemato del clorhidrato del propanolol y sus ésteres, con el objetivo de recopilar los métodos más actuales para su detección y la resolución de su mezcla racémica, de forma que se mantengan informados los farmacéuticos, químicos sintetizadores y otros profesionales relacionados con la temática.                                 

PROPANOLOL

 Es un bloqueador b-adrenérgico muy utilizado en el tratamiento clínico. Este medicamento se une competitivamente a los adrenorreceptores, disminuye la eficacia de los b-agonistas y consecuentemente la presión sanguínea, el impulso y la fuerza de contracción cardíaca. Reduce el grado y la fuerza de contracción del corazón. Su efecto principal es para reducir la respuesta del corazón durante estrés y ejercicios, y reducir la presión sanguínea en pacientes con hipertensión.     

IMPORTANCIA DEL PROPANOLOL

El fármaco propanolol utilizado para tratar la angina de pecho, un trastorno resultante de isquemia relativa es decir de flujo sanguíneo insuficiente, tiene diferentes usos en distintos niveles del cuerpo, incluyendo el corazón a nivel sistémico reduce la respuesta normal del corazón al aumento de la frecuencia cardiaca y de la fuerza de contracción, a nivel tisular, es inotrópico y cromotrópico en sentido negativo, es decir reduce la fuerza contráctil y frecuencia cardiaca respectivamente, como consecuencia de bloquear las acciones de los neuros transmisores liberados por el sistema nervioso simpático cardiaco; a  nivel celular el propanolol impide la elevación del adenosin monofosfato cíclico (AMPc) intracelular , la fosforilación de proteínas, la movilización del calcio  (Ca²⁺)  y el metabolismo inducidos por la actividad del sistema nervioso simpático; a nivel molecular actúa mediante antagonismo competitivo, reversible de la unión de adrenalina y nora adrenalina a los receptores beta-1adrenergicos. Además el uso del propanolol radica en otras indicaciones médicas, como prevención de la migraña, tratamiento del temblor, tratamiento de los síntomas de ansiedad, tratamiento de ciertas alteraciones de tiroides (tirotoxicosis) entre otras lo cual es recomendable su uso en varios países contribuyendo de tal forma para mejorar la calidad de vida del ser humano.

CARACTERÍSTICAS ESTRUCTURALES:

Formula molecular: C₁₆ H₂₂Cl NO₂

Peso molecular.295, 81g/mol

Aceptores de H: éter, alcohol y aminas

Donadores de H: alcohol y aminas

La estructura química del propanolol indica la presencia de un centro quiral que es el sitio específico por el cual ocurre la unión al receptor para realizar su acción biológica.

El propanolol presenta en su estructura heteroátomos capaces de aceptar hidrógeno debido a sus pares de electrones libres que permiten la formación de puentes de hidrógeno con el alcohol, ácidos carboxílicos, aminas y agua.

A continuación se presentan las estructuras de los átomos aceptores de H del propanolol:

El propanolol también presenta en su estructura átomos donadores de hidrógeno los cuales son capaces de ceder hidrógenos, para formar puentes de hidrogeno con otras moléculas  que presenten aceptores de H en su estructura.

CARACTERÍSTICAS ELÉCTRICAS

Además de las características estructurales, el propanolol  también presenta características eléctricas las cuales dependen de las interacciones entre sus átomos y con otras moléculas. Por tal motivo es de fundamental importancia conocer los grupos funcionales presentes en el propanolol, para que de esta forma se puedan describir mejor las características de dicha  molécula.

Alcoholes:

Los alcoholes son compuestos de formula general ROH, donde R es cualquier grupo alquilo incluso sustituido y OH es el grupo hidroxilo.

El grupo puede ser primario, secundario o terciario, puede ser de cadena abierta o cíclico; puede contener un doble enlace, un átomo de halógeno, un anillo aromático, o grupo hidroxilos adicionales por ejemplo:

Todos los alcoholes contienen el grupo –OH (Hidrófilo) el cual, al ser su grupo funcional determinan las propiedades características de estas familias. Las variaciones de las estructuras del grupo -R (Lipófilo) del tipo de un alcano afectan a la velocidad de ciertas reacciones del alcohol e incluso afecta en algunos casos al tipo de reacciones. En síntesis el grupo –OH da a los alcoholes sus propiedades físicas y características, y el alquilo es el que las modifica, dependiendo de su tamaño y forma. El grupo –OH es muy polar, y lo que es más importante, es capaz de establecer puentes de hidrógeno con sus moléculas compañeras, con otras moléculas neutras y con aniones.

El propanolol es un alcohol ya que los otros grupos funcionales  presentes en su estructura son de menor prioridad con respecto al grupo funcional alcohol (R-OH). Es un alcohol de tipo secundario porque esta enlazado a un carbono secundario.

Los alcoholes se comportan como una base de Lewis. Según Lewis una base  es una sustancia que puede “ceder” electrones, es decir, que aporta pares electrónicos libres. Toda sustancia que posee pares electrónicos libres puede fijar un protón. De ahí se sigue que las bases de Lewis se identifican con las bases de Bronsted-Lowry. El cual define una como una especie química, que presenta tendencia al combinarse con un protón.

Estos dos conceptos, completándose conducen a una definición muy general de base: las bases son agentes aceptantes de protones o donadores de electrones. Dichas teorías nos aclaran el comportamiento de los alcoholes como las bases de Lewis ya que la presencia de los pares electrónicos libres en el átomo de oxigeno que presenta el alcohol del propanolol permite que este pueda ceder electrones (Lewis) y aceptar protones (Bronsted-Lowry).

CARACTERÍSTICAS ELECTRICAS

Éteres:

Éteres: Los éteres son compuestos de formula general R-O-R en donde R y R´ pueden ser grupos alquilos, alquenilos, alquinilos, bencilos o arilos. Al igual que los alcoholes, los éteres pueden considerarse derivados del agua donde los grupos sustituyentes R y R´ presentes, reemplazan a los dos átomos de hidrógeno. Si los grupos sustituyentes son de igual naturaleza se formara un éter simétrico y en caso de ser diferente, un éter asimétrico debido a que el ángulo de enlace C-O-C es de 110°, los momentos dipolares de los dos enlaces C-O no se anulan; en consecuencia, los éteres presentan un pequeño momento dipolar neto.

Esta polaridad débil no afecta apreciablemente a los puntos de ebullición de los éteres, que son similares a la de los alcanos de pesos moleculares comparables y mucho más bajos que el de los alcoholes isómeros. Los puentes de hidrógeno que mantienen firmemente unidas las moléculas de alcoholes no son posibles para los éteres,  puesto estos solos tienen hidrógenos unidos al carbono.

El éter presente en la molécula del propanolol se comporta como base de Lewis debido a los pares electrónicos libres de la molécula de oxígeno.

Aminas:

 

Una amina tiene la formula general R-NH2, R2NH o R3N, donde R es un grupo alquilo o arilo. Las aminas se clasifican en primarias, secundarias o terciarias, según el número de grupo que se unen al nitrógeno.

En relación con sus propiedades fundamentales, basicidad y nucleofilicidad  que la acompañan, las aminas de tipos diferentes son prácticamente iguales. Sin embargo, en muchas de sus reacciones, los productos finales dependen del número de átomos de hidrógeno unidos al nitrógeno, por esa razón son diferentes para aminas de distintos tipos.

Las aminas son compuestos polares y pueden formar puentes de hidrógenos intermoleculares salvo a las terciarias. Las aminas tienen punto de ebullición más altos que los compuestos no polares de igual peso molecular, pero inferiores al de los alcoholes o ácidos carboxílicos. Los tres tipos de aminas pueden formar en laces de hidrógeno con el agua. Como resultado las aminas menores son bastante solubles en agua y tienen solubilidad límite al tomar unos 6 átomos de carbono.

La amina presente en la molécula de propanolol es de tipo secundaria y alifática, actúa como base de Lewis debido al par electrónico libre que posee, lo que le da la capacidad de aceptar protones y ceder electrones.

Hidrocarburo aromático:

El naftaleno se clasifica como aromático porque sus propiedades se parecen a las del benceno. Su formula C₁₀H_8, permite suponer un alto grado de no saturación sin embargo en naftaleno resiste (aunque menos que el benceno) las reacciones de adición características de los compuestos no saturados.

La teoría indica que tiene la estructura que se espera de un compuesto aromático: contiene anillos planos de 6 átomos y sus orbitales atómicos pueden proporcionar nubes π que contienen 6 electrones, ósea el sexteto aromático.

CARACTERÍSTICAS FÍSICAS

Solubilidad: 1717,3 ml/ l

El propanolol es un sólido blanco soluble en agua y alcohol, ligeramente soluble en cloroformo y prácticamente insoluble en éter. Su solubilidad en agua y alcohol, se explica por la presencia del grupo OH y NH los cuales permiten que se puedan formar puentes de hidrógeno con otras moléculas; en este caso refiriéndonos específicamente a las de agua y otros alcoholes.

 El éter presente en la molécula del propanolol por poseer pares electrónicos libres y ser capaz de aceptar hidrógeno también contribuye a su solubilidad en agua y alcohol.

El propanolol es ligeramente soluble en cloroformo en comparación con el agua y el alcohol debido a que se presentan interacciones por puentes de hidrógeno débiles,  por lo general los enlaces carbonos-hidrógenos no pueden formar puentes de hidrógeno, pero el cloroformo es una excepción, por que las fuerzas de atracción que ejercen los tres átomos del cloro sobre el átomo de carbono, disminuyen la densidad electrónica del átomo de carbono- hidrógeno, permitiendo de esta manera que la molécula forme puentes de hidrógeno con otras moléculas.

 Es prácticamente insoluble en éter, debido a que   las interacciones entre la molécula del propanolol y el éter son muy débiles, esto se debe a que solo una pequeña parte de la molécula (hidrófilica) puede interactuar con el éter.

La presencia del anillo aromático (naftaleno) en la molécula del propanolol disminuye su solubilidad ya que este anillo constituye la parte hidrofóbica de la molécula.

Para potenciar las características hidrófilicas de la molécula se realizó la preparación  del propanolol como clorohidrato lo cual aumenta la solubilidad de la molécula por las características iónicas de la sal de la amina formada. Todo lo cual explica que el propanolol tenga una solubilidad tan alta.

Densidad: Es una propiedad física que depende de la dimensión de la molécula, la polaridad y el puente de hidrógeno. Cuanto mayor es el número de carbonos las fuerzas intermoleculares son mayores y la cohesión molecular aumenta, resultando en un aumento de la proximidad molecular y por tanto de la densidad

El propanolol posee 16 átomos de carbono lo cual favorece sus fuerzas intermoleculares aumentando su densidad; además presenta heteroátomos (éteres, alcoholes y aminas) que contribuyen a la polaridad de la molécula y la formación de puentes de hidrógeno que también favorecen esta propiedad física.

Punto de ebullición: 434,9 °C a 1 atm

El punto d ebullición de las moléculas con heteroátomos son mas altos que los hidrocarburos de similar peso molecular debido a la presencia de interacciones intermoleculares dipolo-dipolo, que son mas intensas que las interacciones de Londón, los alcoholes y las aminas, además de las interacciones entre dipolo intervienen las fuerzas por puentes de hidrógeno que son mucho mas fuertes que las primeras. Por ello los puntos de ebullición de los alcoholes son generalmente altos.

En el propanolol esta la presencia de 3 heteroátomos de los cuales dos de ellos; el alcohol y la amina presentan además de las interacciones entre dipolo, las fuerzas por puentes de hidrógeno lo cual contribuye al que el punto de ebullición sea mas alto.

Punto de fusión: 163-166 °C

El factor determinante en el punto de fusión es el empaquetamiento de las moléculas en la red cristalina: cuanto mejor se ajusten al cristal mayor será la energía necesaria para romper la red y, por tanto, mayor será el punto de fusión.

La estructura del propanolol presenta una alta polaridad debido a las fuertes interacciones entre sus átomos, lo cual hace que su estructura tenga un mejor empaquetamiento y por tanto un alto punto de fusión.

En soluciones acuosas el propanolol se descompone con oxidación de la cadena de isopropilamina, acompañada por una disminución del pH y decoloración de la solución. Las soluciones son más estables a pH=3 y se descomponen rápidamente a pH alcalino. El valor del pka es 9,45.

El comportamiento acido-base del propanolol según Lewis se explica debido a que la amina que presenta es una base mas fuerte ya que posee menor electronegatividad que el oxígeno del grupo alcohol y éter, ésto hace que tenga menor atracción de los electrones hacia su núcleo por tanto presentan una mayor proximidad con respecto al ácido con que reacciona.

CARACTERÍSTICAS FUNCIONALES

Mecanismo de acción. 

ü Antagonizan de forma competitiva, reversible y especifica los reactores β.

ü Efecto estabilizador de la membrana.

ü Actividad simpática mimética intrínseca o efecto β agonista parcial.

ü Agonismo β2 y selectividad relativa por algún subtipo de receptor.

Según su afinidad relativa por los receptores β1 o β2 se describen en dos grupos:

ü Los cardioselectivos: Bloqueadores β1.

ü Los No- Selectivos. Bloqueadores β1 +  β2.

ü Los de acción mixta (α + β): Labetalol, Carvedilol y Bucindolol.

Características farmacológicas de los betabloqueantes.

ü Esta clasificación se basa en su capacidad relativa para antagonizar las acciones de las aminas simpático miméticos  en algunos tejidos a dosis más bajas que las requeridas en otros tejidos.

ü Algunos tienen actividad de agonista parcial o también llamada “Actividad simpático mimética intrínseca “. Esta lista es interminable porque se describen nuevos betabloqueantes con mucha frecuencia tratando de mejorar la potencia, duración y disminuir la toxicidad.

Farmacocinética:

ü Buena absorción VO. Concentraciones máximas en 1 a 3 horas, algunos vienen para administración EV.

ü Propanolol es el más liposoluble y atraviesa bien la BHE.

ü Pueden administrarse 1 o 2 veces al día.

ü Propanolol y metoprolol son metabolizados por hígado, celiprolol y atenolol se metaboliza menos y nadolol es excretado por orina sin cambios.

Efecto antihipertensivo: Adicionalmente y como consecuencias de estos efectos en el miocardio y músculo liso, se han propuestos varios mecanismos para la acción antihipertensiva de estas drogas:

ü Del gasto cardiaco. Probablemente las más importantes.

ü Inhibición de la secreción de renina por el aparato yuxtaglomerular.

ü Efectos sobre el SNC (lo más liposolubles).

ü  De liberación de NE en los receptores β postsinápticos.

ü  En la resistencia periférica.

ü  En el tono venoso y del volumen plasmático.

ü Reajuste de los baroreceptores.

ü Atenúan la respuesta presora a las catecolaminas durante el ejercicio y el stress.

    Aparato cardiovascular:

ü Reducen las necesidades de oxigeno  al    del O2 por el miocardio y del flujo sanguíneo coronario. Estos últimos son  los que hacen que estas drogas también se utilicen como ANTIANGINOSOS, y han aumentado la sobrevida en pacientes que han  sufrido un IM, porque disminuyen la carga de trabajo al miocardio.

ü     El flujo coronario al disminuir la FC y aumentar el tiempo diastólico para la perfusión coronaria.

ü     Del potencial de acción y de la despolarización espontánea de los marcapasos fisiológicos y ectópicos cardiacos, con el resultado de disminución del automatismo.

ü  Bloquean la broncodilatación adrenérgica β2 de las catecolaminas aumentando la resistencia del flujo de las vías aéreas, produciendo el Asma Bronquial como efecto secundario indeseable.

Efectos metabólicos y endocrinos:

ü Inhiben la lipólisis y la glucogenólisis hepática.

ü Potencian el efecto hipoglicemiante de la insulina y las sulfonilueras y enmascaran los síntomas de la hipoglicemia, hipo o hiperglicemia.

Usos clínicos de los Beta-Bloqueantes.

ü Hipertensión  Arterial: es una de las indicaciones más frecuentes, eficaces y bien tolerados, solos o combinados con un diurético o un vasodilatador, especialmente en blancos y jóvenes. Son esenciales cuando se usan los vasos  dilatadores directos, como parte de la triple cura para contrarrestar la taquicardia refleja.

ü Cardiopatía isquémica: reducen las crisis y mejoran la tolerancia al ejercicio en la angina sobrevida del paciente con IM, y limitan el tamaño del infarto angina de pecho.

Indicaciones no-cardiovasculares:

·        Neuropsiquiatrías:

ü  Profilaxis de la migraña.

ü  Temblor esencial.

ü Ansiedad situacional.

ü Abstinencia alcohólica.

·        Endocrinas:

ü Tirotoxicosis (hipertiroidismo)

ü Hiperparatiroidismo.

Efectos secundarios y tóxicos: Son productos de su acción y muchos ya han sido citados, y  el problema es que no solo bloquean los receptores en el sitio donde se requiere para ser antihipertensivos, sino que también bloquean otros receptores que no tienen que ver con la PA, y se producen los efectos secundarios.

MÉTODO DE ANÁLISIS

Para la detección del propanolol clorhidrato se encontraron varios métodos, dentro de los que se encuentra el realizado por Sungur y otros en 1989 al detectar algunos ß-bloqueadores por cromatografía de placa delgada (CCD), después de una derivatización con

dabsil (4-dimetil-ami-noazobenceno). Los ß-bloqueadores se hicieron reaccionar con dabsil en una solución acetona-agua (3:1) bufereada con una solución de bicarbonato de sodio. Para la separación de los derivados dabsílico de los ß-bloqueadores se probaron diferentes sistemas de solventes, mostrando la mejor separación el sistema de solvente cloroformo- acetona-etanol (95 %) con una proporción de 10:0,5:0,5, siendo el propanolol el ß-bloqueador más sensible a la detección por CCD. Los valores de Rf para cada muestra son reportados en la literatura.

Se señala que las propiedades cromóforas de los derivados dabsílicos permiten una estimación espectrofotométrica en la región visible, cuyo monitoreo evita las interferencias causadas por sustancias que absorben en la región ultravioleta (UV). La coloración de los derivados dabsílicos de los ß-bloqueadores permite una determinación densitométrica por CCD de los compuestos en fluidos biológicos y formas dosificadas.

Otro método empleado para la detección y determinación del racemato de propranolol es la cromatografía líquida de alta resolución (CLAR) en la cual se utiliza una fase móvil formada por dodecil sulfato de sodio (SDS) en ácido fosfórico (0,15 mol/L), acetonitrilo: metanol: agua (36:36:28). La CLAR también fue utilizada por Henry y Repta para medir la estabilidad de una suspensión del clorhidrato de propanolol realizada a partir de tabletas. Para llevar a cabo esta técnica fue necesaria la detección y determinación del propanolol en la suspensión. Se utilizó una columna de octadecilsilano de fase reversa (15 cm x 5 mm) y una pre-columna de 5 cm con el mismo empaquetamiento.

El detector ultravioleta fue fijado a 280 nm. La fase móvil consistió en 30 % de acetonitrilo, octanosulfonato de sodio (4 mmol/L), hidrogenosulfato de tetrabutilamonio (3,5 mmol/L) y 0,1 % de ácido sulfúrico en agua estéril. El flujo utilizado fue de 1 mL/min. Con las condiciones antes mencionadas, el tiempo de retención obtenido para el propanolol fue de 6,3 min. La determinación de la concentración del propanolol clorhidrato en las muestras se obtuvo por el método de cuantificación del estándar externo utilizando como patrón el propanolol , HCl, USP, y la ecuación de la recta de regresión de la curva de calibración se utilizó para determinar la concentración de las muestras basándose en la medición de la altura de los picos.

MÉTODOS DE SEPARACIÓN DE ENANTIÓMEROS

En la revisión realizada se encontraron diversos métodos de separación de los enantiómeros del propranolol y sus ésteres, los cuales se dividen en:

CROMATOGRAFÍA DE CAPA DELGADA

En 1989, Tivert y Beckman realizaron 2 estudios similares con el fin de encontrar un método de separación simple y rápido para aminoalcoholes como: aprenolol y el propanolol sobre placas LiChrosorb Diol F254 HPCCD (10 x 10cm), las cuales son previamente sumergidas en diclorometano y posteriormente secadas antes de realizar la aplicación de las muestras. Como fase móvil se utilizó una mezcla equimolar de diclorometano con etanolamina (0,4 mmol/L) y NbenziloxicarbonilglicilL-prolina (ZGP) (5 mmol/L) como contraión. La detección se efectuó desde 280 ó 300 nm hasta 350 nm.

CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA

 

Mediante la utilización de la CLAR se han desarrollado diferentes métodos de separación, ya sea con el empleo de fases estacionarias quirales, adición de aditivos quirales a la fase móvil por ejemplo contraiones, o por derivatizaciones para llegar a la formación de diastereoisómeros que luego puedan ser separados con la utilización de una columna cromatográfica aquiral. El primer método encontrado fue el empleado por Haginaka y otros14 en un estudio de enantioselectividad y orden de elución enantiomérica del racemato de propanolol y sus ésteres derivados: o-acetil, -propionil, butiril, -valeril acetonitrilo, el flujo se mantuvo a 1 mL/min. Se determinó que la enantioselectividad depende del pH de elución y del modificador orgánico utilizado .La inversión del orden de elución de los enantiómeros del racemato de propanolol y sus ésteres derivados ocurrió en un rango de pH entre 5 y 7 y/ o por variación del modificador orgánico. Tomando en cuenta que el valor de pka del propanolol es de 9,45, este compuesto y sus ésteres son protonados a un valor de pH por encima del rango de elución estudiado; por tanto, al valor de pH entre 5-7 cuando ocurre la inversión del orden de elución de los enantiómeros, la OVM se carga negativamente por causa de su punto isoeléctrico, que se encuentra entre 3,8 y 4,3.

 

Esteres del propanolol HCl:

Este mismo método fue empleado por Ikeda y Hamasaki, 15 para la separación de varios medicamentos enantioméricos, pero utilizaron como fase estacionaria quiral celulosa tris-(3,5-dimetilfenilcarbamato) en una columna Chiralcel OD (25 cm x 4,6 mm). La fase móvil empleada fue perclorato de sodio (0,05 mol/L)/ acetonitrilo (7:3), con un flujo de 1 mL/min para el caso específico del medicamento propanolol.

Otro tipo de columna quiral como la  -AGP (10 cm x 4 mm) fue empleada para la separación de los enantiómeros del propanolol por Haupt y otros, 16 quienes utilizaron como fase móvil buffer de ácido fosfórico (1 mol/L) / hidróxido de sodio (1mol/L) y como modificadores Tween 20 y ácido heptanoico, ajustado para una fuerza iónica de 0,1 y a un valor de pH entre 4,5- 6,5; el flujo empleado fue de 0,9 mL/min

y detección a 250 ó 280 nm. Una columna similar utilizaron

Enquist y Hermansson, 17 para la separación de los enantiómeros de agentes ß-bloqueadores, pero como fase móvil emplearon buffer fosfato que contenía diferentes concentraciones de modificadores no cargados, N,Ndimetiloctilamina (DMOA) o (-)- terodilina. La concentración de buffer fosfato fue 0,01 mol/L en esta fase móvil y 0,02 mol/L en las fases que contenían modificadores cargados. El pH se ajustó a 7,2 con NaOH y un flujo de 0,9 mL/min, y la detección entre 300 y 400 nm (excitación a 295 nm). La enantioselectividad se optimizó cuando se añadió un aditivo en la fase móvil. Erdensson y otros18 combinaron la utilización de la columna quiral con la derivatización del analito para realizar la separación de ß-bloqueadores enantioméricos, ya que éstos son separados en una columna de silicagel enlazada a ácido a - 1-gli-coproteína (3 cm x 3,0 mm), después de ser convertidos en derivados de oxazolidinona por reacción con solución de fosgeno al 20% en tolueno. La fase móvil utilizada fue buffer fosfato de pH=7,0/ /propan-2-ol (de 4 hasta 15 %), a una velocidad de flujo de 0,5 mL/min y detección a 215 nm. El empleo de aditivos quirales en la fase móvil también aportó buenos resultados a Pettersson y otros19 cuando emplearon el contraión N-benziloxicarbonilglicil-L-prolina (ZPG), el cual fue añadido a la fase orgánica para la separación directa de los enantiómeros no derivatizados de amino-alcoholes, así como algunos agentes ß-bloqueadores adrenérgicos. La separación se realizó en una columna LiChrosorb Diol (15 cm x 3 mm) y como fase móvil utilizaron

diclorometano saturado en agua con ZPG (25 mmol/L) y trietilamina (0,2 mmol/L), y detección ultravioleta. La estereoselectividad fue alta para alprenolol, metoprolol y propanolol. Los autores plantean que el contraión contiene un grupo carboxilo que brinda energía electrostática o asociación a complejos mediante enlaces  por puente de hidrógeno (pares-iónicos) con aminas en solventes orgánico. La ZPG también tiene una función carbamato y una amida que pueden dar interacciones adicionales, como por ejemplo los enlaces de hidrógeno con grupos hidroxilos en aminoalcoholes, por lo que es posible una interacción por varios puntos. Además reviste gran importancia la distancia de enlace en la selectividad quiral y ésta se pierde cuando el hidroxilo se encuentra en una posición alejada del grupo amino.

La adición de una amina a la fase móvil (por ejemplo trietilamina) provoca la competencia de ésta con los aminoalcoholes enantioméricos por la formación del par-iónico con ZPG, y además compite por la limitada capacidad de adsorción de la fase estacionaria.

Otro contraión empleado fue el ácido d-10-camforsulfónico por Gupta y otros 20 para la separación de los enantiómeros del propanolol por CLAR en columna Zorbax- CN (25 cm x 9,5 mm). La fase móvil de baja polaridad contenía al contraión quiral y la ter- -butilamina como base en diclorometano/ /hexano/acetonitrilo (79:20:1) y detectado a 280 nm.Los resultados de la investigación demostraron que la resolución aumenta cuando se realiza una recirculación de la fase móvil con las mezclas a separar.

La derivatización del propanolol con (+)-1-(9-fluorenyl) etilcloroformato también fue empleada para lograr la separación quiral y el mejoramiento de la detección, después se efectuó una técnica de CLAR en columna MicroPac SP C8 (15 cm x 4 mm), como fase móvil acetato de sodio / acetonitrilo (3:7) a un flujo de 2mL/min y detección fluorescente a 345 nm (excitación a 265 nm) o detección UV a 254 nm. Cuando se realizó la detección por fluorescencia se detectaron interferencias que fueron eliminadas por absorbancia UV.21

Sin embargo, Mulder y Conemans22 experimentaron la derivatización con isocianato de 2, 3, 4,6-tetra-O-acetil-ß-Dglucopiranosil, después de realizar una extracción en suero con diclorometano. Los derivados D y L- -propanolol fueron separados por CLAR en columnas Spherisorb ODS, se utilizó dihidrogenofosfato de amonio (0,02 mol/L) acetonitrilo (21:29) como fase móvil y detección a 230 nm. Un estudio similar fue realizado por otros autores, donde los enantiómeros del propanolol y 10 compuestos relacionados fueron separados por formación de derivados similares al experimento anterior o con isotiocianato de 2,3,4-tri-O-acetil-alfa-Darabinopiranosil.Posteriormente se les realizó una técnica por CLAR en columna Ultrasphere ODS (15 cm x 4,6 mm), con elución isocrática desde 37 hasta 75 % de acetonitrilo en fosfato de amonio (0,02 mol/L).